Pasaj: Flaskı %70 oranında kaplamış olan hücre kültürünün taze bir besi yeri ortamına aktarma işlemidir.
Bugün pasaj işleminde öncelikle dolaptan çıkarılan malzemeler oda sıcaklığına getirilmek amacıyla sıcak su banyosuna tabi tutuldu. Biyolojik güvenlik kabinine herhangi bir madde sokmadan önce her şey alkolle sterilize edildi. Biyolojik güvenlik kabini içerisinde besi yeri flask üzerine yapışarak büyüyen hücrelerden uzaklaştırıldı. Flasktaki besiyeri kalıntılarını uzaklaştırmak amaçlı hücre kültürü PBS (phosphate buffered saline) tamponu ile yıkandı ve işlem sonrası sıvı flasktan uzaklaştırıldı. Hücreleri yüzeyden kaldırmak için yüzeye tutunmalarını sağlayan proteinleri (integrin gibi) yıkıma uğratan tripsin enzimi ile muamele edildi. Tripsin enzimi 37 ºC'de aktif olduğundan hücre tipine göre flask inkübatörde 2-15 dk. bekletilmelidir. Böylece hücreler yüzeyden ayrılmış oldu. Bekleme sonrası tripsinin hücre içinde de yıkıma sebep olmaması için besi ortamı (DMEM) eklendi. Sonrasında hücreler başka bir flaska alınıp üzerine yeterli miktarda besiyeri eklendi. Böylece hücreler sonraki denemelerde kullanılmak üzere inkübatöre kaldırıldı.
 |
| Pasaj malzemeleri |
 |
| Besi yerinin hücre kültüründen ayrımı |
 |
| PBS tamponu ile hücrelerin yıkanması |
Hiç yorum yok:
Yorum Gönder