PBS TAMPONU HAZIRLAMA

PBS (Phosphate buffered saline) tamponu biyolojik uygulamalarda canlı organizmadaki pH koşullarını sağladığı için kullanılmaktadır. In vitro hücre kültürü çalışmalarında hücrelere uygulanacak örnekler PBS tamponunda hazırlanır.

Tampon hazırlamak için aşağıdaki maddeler belirtilen miktarlarda tartılarak bir beherin içine alındı. 

Malzemeler:

NaCl - 8,0 g/L

KCl - 0,2 g/L

Na₂HPO_{4 - 1,44 g/L}

KH₂PO_{4 -0,24 g/L}

500 mL tampon hazırlamak için beherin üzerine yaklaşık 490 mL distile su eklendi. Daha sonra manyetik karştırıcada çözününceye kadar karıştırıldı. Çözündükten sonra   beherdeki çözelti 500 mL'ye tamamlandı. Daha sonra uygun bir şişeye alınarak denemelerde kullanmak üzere +4ºC buzdolabında saklandı.

Gerekli kimyasalların uygun miktarlarda hassas teraziyle
tartılması

Manyetik karıştırıcıyla çözünürken

Karıştırma hızının ayarlanması (600 rpm)

Beherdeki tampon çözeltisinin balonjojeye aktarılması

Tampon çözeltimiz

HÜCRE KÜLTÜRÜ LABORATUVARINDA BİR GÜN-2: PASAJ İŞLEMİ

Pasaj: Flaskı %70 oranında kaplamış olan hücre kültürünün taze bir besi yeri ortamına aktarma işlemidir.

Bugün pasaj işleminde öncelikle dolaptan çıkarılan malzemeler oda sıcaklığına getirilmek amacıyla sıcak su banyosuna tabi tutuldu. Biyolojik güvenlik kabinine herhangi bir madde sokmadan önce her şey alkolle sterilize edildi. Biyolojik güvenlik kabini içerisinde besi yeri flask üzerine yapışarak büyüyen hücrelerden uzaklaştırıldı. Flasktaki besiyeri kalıntılarını uzaklaştırmak amaçlı hücre kültürü PBS (phosphate buffered saline) tamponu ile yıkandı ve işlem sonrası sıvı flasktan uzaklaştırıldı. Hücreleri yüzeyden kaldırmak için yüzeye tutunmalarını sağlayan proteinleri (integrin gibi) yıkıma uğratan tripsin enzimi ile muamele edildi. Tripsin enzimi 37 ºC'de aktif olduğundan hücre tipine göre flask inkübatörde 2-15 dk. bekletilmelidir. Böylece hücreler yüzeyden ayrılmış oldu. Bekleme sonrası tripsinin hücre içinde de yıkıma sebep olmaması için besi ortamı (DMEM) eklendi. Sonrasında hücreler başka bir flaska alınıp üzerine yeterli miktarda besiyeri eklendi. Böylece hücreler sonraki denemelerde kullanılmak üzere inkübatöre kaldırıldı. 



Pasaj malzemeleri



Besi yerinin hücre kültüründen ayrımı



PBS tamponu ile hücrelerin yıkanması





HÜCRE KÜLTÜRÜ LABORATUVARINDA BİR GÜN-1

Hücre kültürü laboratuvarında bir reseptör hedefleme çalışması... Biyokimya laboratuvarında hazırlanan ilaçlar 1/10 oranında seyreltilerek farklı hücre hatlarına uygulandı.


İlaç seyreltilmek üzere pipete alınırken

Seyreltilmiş ilaç hücrelere uygulanırken

                                                                               

HÜCRE KÜLTÜRÜNE GİRİŞ

Kullanılan materyaller:

1- CO2 İnkübatörü: İnkübatörün içerisi 37ºC’dir ve içerisindeki havada % 5 oranında CO2 bulunur. Sıcaklık derecesi ve havanın içinde bulunan CO2 oranıyla hayvan hücrelerinin yaşaması için uygun ortam oluşturulur. CO2 tampon gazı olarak kullanılmaktadır. Hücrelerin bulunduğu besiyerlerinin pH’ı 7,2-7,4 arasında değişmektedir. Hücreler bu besiyerindeki maddeleri kullandıkça metabolik atıklar ortaya çıkar ve bu atıklar besi yerinin pH değerini değiştirir. Bu durumda inkübatörün içerisinde bulunan CO2  gazı devreye girer ve tampon görevi görerek pH’ı dengeler.

2-Biyolojik Güvenlik Kabini: Hücreye ve deneye zarar verebilecek canlı ve cansız partiküllerin hücre kültürü ile temasını engeller. Havayı filtrelerden geçirerek ortamda maksimum sterilizasyon sağlanır. Bu yüzden yapılacak işlemler bu kabin içerisinde titizlikle yapılır.Kabinin temiz tutulması çalışmaların kontaminasyondan uzak bir şekilde yürütülmesi açısından çok önemlidir.

3-Flask: Hücre besi ortamının bulunduğu ve hücrelerin büyütüldüğü kaplardır. Yüzeye tutunan hücrelerle çalışılması durumunda yüzeyin %70'i dolduğunda yeni bir pasaj hazırlanarak hücreler için tekrar üreyebilecekleri bir ortam oluşturulur.

      









                              

BİZ KİMİZ???

Merhaba, biz Begüm Kınay ve Ece Derin Aydın. 

TAKEV Fen Lisesi 10.sınıfta okuyoruz. Birlikte birçok proje yaptık. İlk projemiz TÜBİTAK'ın ilköğretim kademesinde matematik alanındaydı. Bilimsel çalışmalarımız dışında ise Destination Imagination (yaratıcılık), iki kere de First Lego League yarışmasına katıldık. 

Bireysel olarak ise ben, Derin özellikle piyano olmak üzere müzik ve sanat alanına ilgi duyuyorum. Bugüne kadar piyano alanında da kişisel olarak yarışmalara katıldım ve bazı ödüller elde ettim. 

Ben, Begüm olarak daha çok spor alanına ilgi duyuyorum. Başta su sporları olmak üzere uzun süredir sörf yapıyorum ayrıca son yıllarda yüzme alanına da yöneldim. 

Dışarıdan bakıldığında farklı kişilikler olmamıza rağmen birbirimizi tamamlayarak iyi bir takım olduğumuzu düşünüyoruz. Proje tespiti araştırma ve deney aşamalarında her zaman ortak çalışarak bilgi alış-verişi yaparız; fakat sunumda ikimiz de en çok ilgimizi çeken kısımları sunmayı tercih ediyoruz. Sunumlarımızı öncelikle alanda uzman kişiler daha sonra yakın çevremiz ve en çok da birbirimize anlatarak geliştiriyoruz. Bilimsel olarak çoğu ilgi alanımız benzer olduğu gibi biyoloji ve kimya da hep bunlardan biriydi. İlgi alanlarımız benzer olduğu gibi son yıllarda ikimizin hedefi de Tıp Fakültesi yönünde oldu. 

Ben Begüm olarak küçüklüğümden beri ailemden doktorluk mesleğinin hem iyi hem kötü taraflarını gördüm ama bu benim fikrimi değiştirmedi. Sağlığın en değerli şey olduğu bu dünyada insanlara bu konuda yardım etmenin beni çok mutlu edeceğini biliyorum. Ayrıca anatomiye olan ilgim ve insan sevgim ile bu mesleği yaparak dünyaya bir şeyler katabileceğimi düşünüyorum. 

Ben Derin olarak ise Endokrin alanında uzmanlaşmak istiyorum. Tıp alanını ve Endokrin'i seçmemdeki en büyük etken diabet hastası olmamdı. Bu meslekte çalışarak insanlarla empati kurabileceğimi ve kendi deneyimlerimi de paylaşarak yardıma ihtiyacı olan insanlara yardım edebileceğimi düşünüyorum. 

Bu yıl ise neden bir biyokimya projesi yapmıyoruz fikriyle yola çıktık. Öncelikli ilham kaynağımız toplumsal problemlerdi. Son yılların en etkin sorunlarından biri olan bağımlılığı seçerek bağımlılığın tespiti ve tedavisine katkı sağlamayı amaçlıyoruz. Daha çok kişiye ulaşabilmek amacıyla yıl içerisinde bu site üzerinden çalışmalarımız, fotoğraf ve zaman zaman da videolarımız ile sizinle olacağız.