HÜCRE KÜLTÜRÜ LABORATUVARINDA BİR GÜN-2: PASAJ İŞLEMİ

Pasaj: Flaskı %70 oranında kaplamış olan hücre kültürünün taze bir besi yeri ortamına aktarma işlemidir.

Bugün pasaj işleminde öncelikle dolaptan çıkarılan malzemeler oda sıcaklığına getirilmek amacıyla sıcak su banyosuna tabi tutuldu. Biyolojik güvenlik kabinine herhangi bir madde sokmadan önce her şey alkolle sterilize edildi. Biyolojik güvenlik kabini içerisinde besi yeri flask üzerine yapışarak büyüyen hücrelerden uzaklaştırıldı. Flasktaki besiyeri kalıntılarını uzaklaştırmak amaçlı hücre kültürü PBS (phosphate buffered saline) tamponu ile yıkandı ve işlem sonrası sıvı flasktan uzaklaştırıldı. Hücreleri yüzeyden kaldırmak için yüzeye tutunmalarını sağlayan proteinleri (integrin gibi) yıkıma uğratan tripsin enzimi ile muamele edildi. Tripsin enzimi 37 ºC'de aktif olduğundan hücre tipine göre flask inkübatörde 2-15 dk. bekletilmelidir. Böylece hücreler yüzeyden ayrılmış oldu. Bekleme sonrası tripsinin hücre içinde de yıkıma sebep olmaması için besi ortamı (DMEM) eklendi. Sonrasında hücreler başka bir flaska alınıp üzerine yeterli miktarda besiyeri eklendi. Böylece hücreler sonraki denemelerde kullanılmak üzere inkübatöre kaldırıldı. 



Pasaj malzemeleri



Besi yerinin hücre kültüründen ayrımı



PBS tamponu ile hücrelerin yıkanması





HÜCRE KÜLTÜRÜ LABORATUVARINDA BİR GÜN-1

Hücre kültürü laboratuvarında bir reseptör hedefleme çalışması... Biyokimya laboratuvarında hazırlanan ilaçlar 1/10 oranında seyreltilerek farklı hücre hatlarına uygulandı.


İlaç seyreltilmek üzere pipete alınırken

Seyreltilmiş ilaç hücrelere uygulanırken

                                                                               

HÜCRE KÜLTÜRÜNE GİRİŞ

Kullanılan materyaller:

1- CO2 İnkübatörü: İnkübatörün içerisi 37ºC’dir ve içerisindeki havada % 5 oranında CO2 bulunur. Sıcaklık derecesi ve havanın içinde bulunan CO2 oranıyla hayvan hücrelerinin yaşaması için uygun ortam oluşturulur. CO2 tampon gazı olarak kullanılmaktadır. Hücrelerin bulunduğu besiyerlerinin pH’ı 7,2-7,4 arasında değişmektedir. Hücreler bu besiyerindeki maddeleri kullandıkça metabolik atıklar ortaya çıkar ve bu atıklar besi yerinin pH değerini değiştirir. Bu durumda inkübatörün içerisinde bulunan CO2  gazı devreye girer ve tampon görevi görerek pH’ı dengeler.

2-Biyolojik Güvenlik Kabini: Hücreye ve deneye zarar verebilecek canlı ve cansız partiküllerin hücre kültürü ile temasını engeller. Havayı filtrelerden geçirerek ortamda maksimum sterilizasyon sağlanır. Bu yüzden yapılacak işlemler bu kabin içerisinde titizlikle yapılır.Kabinin temiz tutulması çalışmaların kontaminasyondan uzak bir şekilde yürütülmesi açısından çok önemlidir.

3-Flask: Hücre besi ortamının bulunduğu ve hücrelerin büyütüldüğü kaplardır. Yüzeye tutunan hücrelerle çalışılması durumunda yüzeyin %70'i dolduğunda yeni bir pasaj hazırlanarak hücreler için tekrar üreyebilecekleri bir ortam oluşturulur.